一、產(chǎn)品簡介

293細(xì)胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒——PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit，適用于HEK293細(xì)胞及其他HEK293細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)、DNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及蛋白表達(dá)。

PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit適用范圍：HEK293細(xì)胞懸浮培養(yǎng)、其他HEK293細(xì)胞的高密度懸浮培養(yǎng)、DNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及蛋白表達(dá)。

該試劑盒包括下列試劑：

（1）PolyTool™ 293 Transfection Reagent （懸浮293細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑）；

（2）PolyTool™ 293 Medium（化學(xué)限定293 細(xì)胞無血清細(xì)胞培養(yǎng)液）；

（3）PolyTool™ 293 B（化學(xué)成分限定的、高濃度營養(yǎng)成分的補(bǔ)料 1）；

（4）PolyTool™ 293 C（化學(xué)成分限定的、高濃度營養(yǎng)成分的補(bǔ)料 2）。

PolyTool™ 293 Transfection Reagent 配合PolyTool™ 293 Medium、PolyTool™ 293 B及PolyTool™ 293 C使用，可大幅度提高重組蛋白的表達(dá)產(chǎn)量。

二、操作流程

1.細(xì)胞接種（以25mL體系為例）：

根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，選擇合適的接種密度，建議接種密度為 1×10⁶ cells/mL，待第二天細(xì)胞密度達(dá)到2×10⁶ cells/mL左右，活性大于95%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：

建議質(zhì)粒（μg）與試劑（μL）參考配比區(qū)間為1:3~1:5之間。具體步驟如圖1所示（以1:4為例）：

（1）使用本樣品前渦旋混勻5秒，使用1.25 mLPolyTool™ 293 Medium稀釋100 μL的轉(zhuǎn)染試劑，并吹打均勻；

（2）使用1.25 mL PolyTool™ 293 Medium稀釋25 μg質(zhì)粒，并吹打混勻；

（3）將(1)和(2)所述溶液混合均勻；

（4）將(3)所述混合溶液室溫靜置孵育10~15 min；

（5）將(4)中的復(fù)合物溶液加入25 mL的細(xì)胞培養(yǎng)體系中，放回?fù)u床中，在37 ℃、震蕩速度120 rpm下繼續(xù)培養(yǎng)。

3.產(chǎn)物表達(dá)與檢測：

（1）轉(zhuǎn)染24小時(shí)、72小時(shí)、120小時(shí)、168小時(shí)后加入3%（75 mL/100mL）PolyTool™293 B，0.3%（75 μL/25 mL）PolyTool™ 293 C。

（2）轉(zhuǎn)染后第5~7天測定產(chǎn)物表達(dá)量。多數(shù)蛋白的合成在轉(zhuǎn)染后第5天左右可達(dá)到最高值，客戶可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)及表達(dá)量選擇適宜的收獲時(shí)間。

圖1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染示意圖

293細(xì)胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒——PolyTool™ 293-Fit Transfection Reagent Kit代理——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù)，努力成長為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。