大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞（E.coli DH5α）制備

　更新時(shí)間：2024-09-25 點(diǎn)擊量：160

一、DH5α

DH5α是大腸桿菌(Escherichia coli)的一種感受態(tài)細(xì)胞系，通常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。這些細(xì)胞被設(shè)計(jì)成對(duì)外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。DH5α感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于吸收外源DNA特別有效，這使得它們?cè)诨蚬こ毯头肿由飳W(xué)研究中成為常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室工具。

二、操作步驟

1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過(guò)夜（約16小時(shí)）；

2、取1ml過(guò)夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100ml LB培養(yǎng)基中，在37℃搖床上劇烈振蕩培養(yǎng)約2.5-3小時(shí)（250-300rpm）；

3、將0.1M CaCl2溶液置于冰上預(yù)冷；以下步驟需在超凈工作臺(tái)和冰上操作；

4、吸取1.5ml培養(yǎng)好的菌液至1.5ml離心管中，在冰上冷卻10分鐘；

5、4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；

6、棄去上清，加入100微升預(yù)冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細(xì)胞重新懸浮，在冰放置20分鐘；

7 、4℃下3000 g冷凍離心5分鐘；

8 、棄去上清，加入100微升預(yù)冷0.1M CaCl2溶液，用移液槍輕輕上下吸動(dòng)打勻，使細(xì)胞重新懸?。?/span>

9 、細(xì)胞懸浮液可立即用于轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)或添加冷凍保護(hù)劑（15% - 20%甘油）后超低溫冷凍貯存?zhèn)溆茫ǎ?/span>70℃）。